JoVE Encyclopedia of Experiments
Микробиология
0 просмотров • 1:28 мин • October 30th, 2025
Возьмем культуру Corynebacterium glutamicum, преобразованную с помощью плазмиды, несущей флуоресцентный репортерный ген ниже антитерминатора рибонуклеиновой кислоты или последовательности RAT, в многолуночном планшете.
Во время транскрипции RAT-РНК образует структуру стволовой петли, которая блокирует РНК-полимеразу, останавливая экспрессию репортерных генов.
Плазмида также конститутивно экспрессирует LicV, гибридный белок, содержащий RAT-РНК-связывающий белок, LicT, и чувствительный к синему свету домен VVD.
В темноте LicV остается мономерным и не связывается со стволовой петлей RAT-RNA, которая блокирует транскрипцию репортерного гена.
Осветите культуру синим светом, чтобы вызвать конформационное изменение в домене VVD, которое запускает димеризацию LicV.
Димеризованный LicV связывается с RAT-РНК, разворачивая структуру стволовой петли и позволяя РНК-полимеразе транскрибировать репортерный ген, производя флуоресцентный репортерный белок.
Наблюдайте за культурой под флуоресцентным микроскопом.
Сильная флуоресценция репортера после освещения синим светом и минимальная флуоресценция в темноте подтверждают успешный оптогенетический контроль.