Бактериальный биосенсорный анализ для обнаружения биодоступной ртути в анаэробных условиях

Начните с установки для анализа, содержащей флаконы, помещенные в анаэробную камеру.

Каждый флакон содержит среду с добавлением нитрата натрия, ионов ртути и сульфата магния в различных концентрациях.

Поворачивайте установку, чтобы смешать компоненты, затем инкубируйте.

Во время инкубации сульфат магния способствует образованию небиодоступных комплексов ртути, снижая количество свободных, биодоступных ионов ртути в зависимости от концентрации.

Затем добавьте индуцированные биосенсоры, генетически модифицированные бактерии, несущие плазмиду, и перемешайте.

Плазмида содержит ртуть-чувствительный транскрипционный регулятор и промотор, связанный с флуоресцентным репортерным геном.

В анаэробных условиях бактерии используют нитраты для дыхания.

Свободные ионы ртути проникают в клетки, связывают транскрипционный регулятор и активируют флуоресцентный ген, производя флуоресцентные белки.

Переложите аликвоты из каждого флакона в многолуночный планшет.

С помощью считывателя пластин измерьте интенсивность флуоресценции.

Снижение флуоресценции с увеличением концентрации сульфата магния подтверждает способность биосенсора обнаруживать изменения биодоступной ртути.

Перед началом эксперимента проверьте анаэр