Обогащение бактериальных липопротеидов с помощью неионогенного детергентного разделения фаз

0 просмотров4:16 мин • October 30th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Возьмите бактериальный лизат, содержащий гидрофильные белки, липопротеиды и белковые агрегаты.

Добавьте холодное неионогенное моющее средство, способное к разделению фаз при более высоких температурах.

Инкубируйте на льду и периодически перемешивайте. Моющее средство связывается с липидным фрагментом липопротеина, образуя белково-моющие комплексы.

Нагрейте смесь, чтобы вызвать разделение фаз. Липопротеины концентрируются в детергентной фазе, в то время как гидрофильные белки остаются в водной фазе.

Центрифугируйте при комнатной температуре для поддержания двухфазного разделения.

Выбросьте водную фазу, добавьте холодный буфер к моющей фазе и перемешайте.

Повторите цикл охлаждения, нагревания и центрифугирования, чтобы обогатить липопротеины.

Затем добавьте холодный буфер и центрифугу при низкой температуре, чтобы гранулировать нелипопротеиновые агрегаты.

Перенесите надосадочную жидкость в пробирку, содержащую растворитель, осаждающий белки, и инкубируйте при минусовой температуре до осаждения липопротеинов.

Центрифугируйте при комнатной температуре и выбросьте надосадочную жидкость.

Осажденные липопротеины готовы к последующим исследованиям.

Дополните надосадочную жидкость поверхностно-активным веществом TX-114 до конечной концентрации 2%, добавив равный объем 4% поверхностно-активного вещества в ледяной TBSE. Инкубируйте добавленную надосадочную жидкость на льду в течение одного часа, перемешивая путем инверсии каждые 15 минут. Поместите трубку на водяную баню с температурой 37 градусов Цельсия и инкубируйте в течение 10 минут, чтобы вызвать разделение фаз.

Центрифугируйте образец при 10 000 умноженных на g в течение 10 минут при комнатной температуре, чтобы сохранить двухфазное разделение. Аккуратно отпижите верхнюю водную фазу и выбросьте. Добавьте ледяной TBSE в нижнюю фазу поверхностно-активного вещества, чтобы наполнить пробирку до исходного объема и перемешать.

Выдерживать на льду в течение 10 минут. После инкубации поместите пробирку на водяную баню с температурой 37 градусов Цельсия и инкубируйте в течение 10 минут, чтобы вызвать разделение фаз, затем центрифугируйте при 10 000 раз больше g в течение 10 минут при комнатной температуре. Повторив эти шаги еще раз в общей сложности три разделения, удалите верхнюю водную фазу и выбросьте.

Удалите гранулы осажденных белков, образовавшихся в ходе экстракции, добавив один объем ледяного TBSE в фазу поверхностно-активного вещества. Центрифугируйте при температуре четыре градуса Цельсия и 16 000 раз больше g в течение двух минут, чтобы измельчить нерастворимый белок. Немедленно перенесите надосадочную жидкость в свежую микроцентрифужную пробирку объемом 2,0 миллилитров, содержащую 1 250 микролитров 100% ацетона.

Перемешайте образец методом инверсии и инкубируйте в течение ночи при температуре минус 20 градусов Цельсия до осаждения белка. На следующий день центрифугируйте образец при 16 000 раз g в течение 20 минут при комнатной температуре, чтобы гранулировать липопротеины с учетом ориентации пробирки. Дважды промойте гранулу 100% ацетоном перед сцеживанием ацетона и дайте образцу высохнуть на воздухе.

Затем добавьте от 20 до 40 микролитров 10-миллимолярного Tris-HCL, pH 8,0, и тщательно ресуспендируйте гранулу путем пипетирования вверх и вниз у стенки с осажденными липопротеинами.

10:24

Разделение конверта клетки для Грам-отрицательных бактерий в Внутренние и Внешние фракции Membrane с Технически регулировками для Acinetobacter baumannii

Похожие видео

0 Просмотры

09:26

Идентификация белков антибактериального иммунитета в кишечной палочке с использованием MALDI-TOF-TOF-MS/MS и нисходящего протеомного анализа

Похожие видео

0 Просмотры

11:12

Осаждение белка на основе органических растворителей для надежной очистки протеома перед масс-спектрометрией

Похожие видео

0 Просмотры

07:33

Липидов везикул-опосредованной аффинной хроматографии с использованием магнитных Активированный сортировки клеток (LIMACS): новый метод для анализа Белково-липидные взаимодействия

Похожие видео

0 Просмотры

02:57

Выделение липидов из нейтрофилов, полученных из крови человека, путем двухфазного разделения

Похожие видео

0 Просмотры

12:57

Выделение и химическая характеристика липида А из грамотрицательных бактерий

Похожие видео

0 Просмотры

11:55

Мембранные процессы переноса анализироваться Высококвалифицированные параллельной системы нанопор чип Разрешение одного белка

Похожие видео

0 Просмотры

10:59

Обогащение бактериальных липопротеинов и подготовка N-терминальный Lipopeptides структурные определения по масс-спектрометрии

Похожие видео

0 Просмотры

11:10

Моющее бесплатно сверхскоростной воссоздание мембранных белков в липидных бислоев с помощью дополнительных заряженные Proteoliposomes Fusogenic.

Похожие видео

0 Просмотры

08:43

Протокол изоляции капелька быстрого липидов используя налаженные органеллы изоляции комплект

Похожие видео

0 Просмотры

Последнее обновление: 15 августа 2026