Обогащение бактериальных липопротеидов с помощью неионогенного детергентного разделения фаз

Возьмите бактериальный лизат, содержащий гидрофильные белки, липопротеиды и белковые агрегаты.

Добавьте холодное неионогенное моющее средство, способное к разделению фаз при более высоких температурах.

Инкубируйте на льду и периодически перемешивайте. Моющее средство связывается с липидным фрагментом липопротеина, образуя белково-моющие комплексы.

Нагрейте смесь, чтобы вызвать разделение фаз. Липопротеины концентрируются в детергентной фазе, в то время как гидрофильные белки остаются в водной фазе.

Центрифугируйте при комнатной температуре для поддержания двухфазного разделения.

Выбросьте водную фазу, добавьте холодный буфер к моющей фазе и перемешайте.

Повторите цикл охлаждения, нагревания и центрифугирования, чтобы обогатить липопротеины.

Затем добавьте холодный буфер и центрифугу при низкой температуре, чтобы гранулировать нелипопротеиновые агрегаты.

Перенесите надосадочную жидкость в пробирку, содержащую растворитель, осаждающий белки, и инкубируйте при минусовой температуре до осаждения липопротеинов.

Центрифугируйте при комнатной температуре и выбросьте надосадочную жидкость.

Осажденные липопротеины готовы к последующим исследованиям.

Дополните надосадочную жидкость поверхностно-активны