Селективная очистка бактериального белка методом отрицательной ионообменной хроматографии

Начните с раствора ионообменной смолы, содержащего положительно заряженные функциональные группы для селективного связывания с белками.

Затем возьмите белковый экстракт, полученный из бактериальных клеток хозяина, сконструированных для сверхэкспрессии фактора вирулентности патогенной бактерии Helicobacter pylori.

Экстракт содержит целевой фактор вирулентности вместе с белками клетки-хозяина в буфере при pH 8.

Смешайте белковый экстракт со смолой и инкубируйте с перемешиванием, чтобы обеспечить равномерное взаимодействие белка и смолы.

Белки-хозяева, имеющие изоэлектрические точки ниже буферного pH, становятся отрицательно заряженными и связываются с положительно заряженной смолой.

Белок-мишень с изоэлектрической точкой, близкой к буферному pH, остается в значительной степени незаряженным и остается несвязанным.

Перенесите белково-смоляную суспензию в хроматографическую колонку и дайте смоле осесть.

Соберите жидкую фазу, содержащую несвязанный целевой белок.

Промойте смолу вместе с буфером, чтобы обеспечить максимальное восстановление целевого белка.

Чтобы приготовить 15 миллилитров смолы DEAE, суспензируйте 0,6 грамма сухого порошка смолы DEAE в 30 миллилитрах буфера Tris-HCl при комнатной