Микрофлюидная покадровая микроскопия для изучения персистенции антибиотиков у бактерий

Начните с экспоненциально растущих бактериальных клеток, экспрессирующих флуоресцентно меченный ДНК-связывающий гибридный белок, чтобы визуализировать нуклеоид.

Добавьте клетки к входным отверстиям заранее подготовленной микрофлюидной пластины.

Затем введите среды, содержащие антибиотики, и среды, не содержащие антибиотиков, в отдельные входные отверстия для раствора.

Запечатайте пластину, установите ее на предметный столик микроскопа и начните покадровую съемку.

Сначала загрузите клетки в камеру для культивирования.

Затем перфузируйте в камеру среды, не содержащие антибиотиков, чтобы поддерживать экспоненциальный рост клеток.

Наконец, вводят среды, содержащие антибиотики.

Антибиотик вызывает двухцепочечные разрывы ДНК, убивая восприимчивые клетки. Эти клетки демонстрируют уплотненные, нереплицирующиеся нуклеоиды со стабильной флуоресценцией.

Вернитесь к средам, не содержащим антибиотиков, чтобы ускорить выздоровление.

Персистирующие клетки — небольшая субпопуляция, которая выживает после лечения антибиотиками — возобновляют репликацию ДНК, удлиняются и делятся.

Это восстановление приводит к увеличению флуоресценции в персистентных клетках, что позволяет визуально отличать их от восприимчивы