Энциклопедия экспериментов JoVE
Микробиология
0 просмотров • 3:09 мин. • October 30th, 2025
Начните с бактериальной культуры и выполните серийное разведение, чтобы снизить плотность клеток.
Возьмите небольшую аликвоту конечного разбавления и нанесите ее на агаровую пластину.
Добавьте стерильные стеклянные шарики и осторожно встряхните пластину, чтобы обеспечить пространственное разделение клеток, что имеет важное значение для получения хорошо изолированных колоний.
Удалите стеклянные бусины, затем переверните пластину и инкубируйте.
Отдельные клетки размножаются и образуют отдельные колонии, создавая моноклональную культуру, в которой каждая колония состоит из генетически однородной бактериальной популяции.
Выберите отдельные колонии и переложите их в отдельные пробирки, содержащие жидкую среду.
Инкубируйте пробирки с перемешиванием. После инкубации оцените помутнение каждой культуры.
Бактериальные клетки, взвешенные в среде, рассеивают свет, из-за чего культуры кажутся более мутными с увеличением плотности клеток.
Выберите пробирку с самой высокой мутностью, которая указывает на самую плотную популяцию моноклональных бактерий, для последующих применений.
Наклейте на три бутылки, приготовленные из 100 миллилитров бульона LB Lennox, номер один, номер два и номер три.
Пипеткой внесите 0,1 миллилитра полученной бактериальной культуры в одну бутылку. Закройте бутылку крышкой и покачивайте ее рукой в течение одной минуты, чтобы получить однородный раствор. Далее пипеткой капаем 0,1 миллилитра из бутылки номер один в бутылку номер два. Снова закройте бутылку крышкой и покачивайте ее рукой в течение одной минуты. Выполните последнее разведение, пипетируя 0,1 миллилитра из флакона номер два в флакон номер три. Закройте бутылку крышкой и встряхивайте ее рукой в течение одной минуты.
А затем пипеткой нанесите по 20 микролитров раствора на каждую из четырех чашек Петри. Затем поместите четыре автоклавные стеклянные бусины диаметром три миллиметра в каждую из чашек Петри. Закройте крышки чашек Петри и встряхивайте их вручную в течение одной минуты.
Когда закончите, переверните чашки Петри вверх дном и инкубируйте пластины в инкубаторе при температуре 37 градусов Цельсия в течение 24 часов.
С помощью шпателя из нержавеющей стали извлеките полученные моноклональные бактерии из четырех чашек Петри и поместите их в оставшиеся семь пробирок, содержащих 12,5 миллилитров бульона LB Lennox. Оставьте пробирки в инкубаторе с температурой 37 градусов Цельсия на 24 часа, а затем выберите ту, которая с наибольшим рассеянием света с помощью визуального колориметрического метода.