Производство и аэрозольное осаждение спор Bacillus subtilis

Начните с культуры Bacillus subtilis, высокоустойчивой спорообразующей бактерии.

Инокулируйте культуру в среду с ограниченным содержанием питательных веществ и инкубируйте с аэрацией, чтобы вызвать спороношение.

Спорулирующие клетки производят спящие споры с защитными слоями.

Переложите культуру в пробирку и центрифугуйте для гранулирования спор. Удалите надосадочную жидкость, содержащую остаточные клетки и мусор.

Промойте гранулу стерильной дистиллированной водой, повторите центрифугирование и повторно суспендируйте споры в стерильной воде.

С помощью фазово-контрастного микроскопа подтвердите чистоту спор, выявив яркие споры и проверив отсутствие загрязняющих веществ.

Выполняйте последовательные разведения спор, наносите питательный агар и инкубируйте, чтобы жизнеспособные споры могли прорасти в колонии. Подсчитайте колонии, чтобы определить концентрацию спор.

Исходя из этой концентрации, отрегулируйте количество спор и загрузите разведенный образец в аэрозольную насадку. Распылите его на стерильную стеклянную поверхность, где суспензия быстро высыхает, образуя тонкий, однородный монослой спор.

Для производства спор необходимо перевести 5 миллилитров культуры соответствующего штамма B.sub