Анализ жизнеспособности микрокистоза энегнойной палочки с помощью проточной цитометрии

Возьмите отдельные образцы живых и мертвых клеток Microcystis aeruginosa .

Смешайте выборки, чтобы создать объединенную популяцию.

Микроцистис содержит фикоцианин, аутофлуоресцентный пигмент, который остается нетронутым в живых клетках, но разлагается в мертвых клетках.

Сделайте образец вихревым слоем, чтобы разбить комки и получить однородную одноклеточную суспензию.

Добавьте непроницаемый для клеточной мембраны, связывающий нуклеиновые кислоты флуоресцентный зонд и инкубируйте образец в темноте, чтобы предотвратить фотообесцвечивание.

Зонд избирательно проникает в мертвые клетки через их поврежденные мембраны и связывается с внутриклеточной ДНК.

Пропустите образец через проточный цитометр для измерения автофлуоресценции фикоцианина и флуоресценции зонда нуклеиновых кислот с помощью соответствующих лазеров с длиной волны возбуждения.

Живые клетки излучают сильную фикоцианиновую автофлуоресценцию, но не проявляют зондового сигнала.

Напротив, мертвые клетки демонстрируют сниженную эмиссию пигмента и повышенную флуоресценцию зонда, что подтверждает повреждение мембраны.

Это позволяет отличать богатые пигментом живые клетки от мертвых.

Чтобы оптимизировать поглощение молекулярных зондовых клето