Энциклопедия экспериментов JoVE
Микробиология
0 просмотров • 3:37 мин. • October 30th, 2025
Возьмите культуру Lactococcus lactis , экспрессирующую мембраносвязанную пептидазу NisP.
Смешайте культуру с питательной средой.
Добавьте расплавленный агар, перемешайте и вылейте в тарелку, чтобы равномерно распределить L. lactis в агаре.
После затвердевания вбейте отверстия в агар.
Затем возьмем рекомбинантную кишечную палочку , продуцирующую дикий тип или модифицированные варианты-предшественники антимикробного пептида низина.
Центрифугируйте для гранулирования бактерий, выбросьте надосадочную жидкость и повторно суспендируйте гранулы в буфере.
Ультразвук для лизирования бактерий, центрифугирование и перенос надосадочной жидкости в свежие пробирки.
Нормализуйте лизаты до равной оптической плотности с помощью буфера для обеспечения стабильного уровня пептидов.
Пипетируйте каждый образец в отдельные агаровые лунки и инкубируйте образцы.
Во время инкубации пептиды-предшественники низина диффундируют в агар и расщепляются NisP, образуя зрелый низин.
Зрелый низин подавляет рост L. lactis , образуя четкие ореолы вокруг лунки.
Сравните размеры ореола, чтобы оценить антимикробную активность вариантов низина.
Добавьте один миллилитр предварительной культуры Lactococcus lactis к 25 миллилитрам бульон
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео