Приготовление искусственной мокроты среды для имитации муковисцидоза мокротой легких ex vivo

Муковисцидоз (МВ) — это генетическое заболевание, которое вызывает накопление густой, липкой слизи в легких, образуя мокроту, поддерживающую рост патогенных микроорганизмов.

Чтобы приготовить искусственную мокроту от муковисцидоза, берут растворы с ключевыми биохимическими свойствами.

Смесь муцина содержит муцины, которые являются высокомолекулярными гликопротеинами, которые реплицируют вязкость мокроты CF и способствуют микробной адгезии.

Химическая смесь поставляет ионы и глюкозу для поддержания микробного метаболизма.

Биологическая смесь обеспечивает питательные вещества для роста микроорганизмов.

Соедините все до образования искусственной мокроты (АСМ).

Добавьте буферный агент для поддержания умеренно кислого pH, способствующего выживанию патогенов.

Для стерилизации среды АСМ переносят в камеру вакуумной фильтрации с мембранным фильтром.

Фильтруйте при перемешивании, чтобы избежать агрегации муцина и предотвратить засорение фильтра.

Вакуум пропускает среду через фильтр, удаляя микробные загрязнители и высокомолекулярные агрегаты.

ASM готов к культивированию микробов, ассоциированных с CF.

Приготовьте искусственную среду для удаления мокроты, добавив 250 миллилитров ASCM в 1-литровую бутылку, содержащую ASMM. Затем добавьте 250 миллилитров ASBM в бутылку среднего размера. Титруйте среду с помощью основного 1-молярного буфера MOPS до достижения pH 6,3 на бумаге с pH.

Охладите искусственную среду мокроты при температуре 4 градуса Цельсия до фильтрации. Затем, чтобы начать процесс фильтрации, переведите 200 миллилитров нефильтрованной среды искусственной мокроты в вакуумную систему фильтрации с фильтром с размером пор 0,22 микрометра. После подключения системы фильтрации к вакуумному насосу включите вакуумный насос. Затем поместите камеру на орбитальный шейкер, встряхивая со скоростью 90 оборотов в минуту в холодном помещении при температуре 4 градуса Цельсия.

Меняйте фильтр после фильтрации 350 миллилитров среды, чтобы решить проблему засорения. После того, как значительное количество будет процежено, добавьте дополнительные 150 миллилитров среды для фильтрации. Повторяйте фильтрацию с дополнительными камерами до тех пор, пока вся среда не будет отфильтрована.