Анализ роста бактерий с ограниченным содержанием металлов для изучения роли генов, чувствительных к металлу

Возьмем бактерии дикого типа и мутантные бактерии, у которых отсутствует специфический ген, реагирующий на металлы, присутствующий в диком типе.

Бактерии выращивают в средах с обедненным металлами, чтобы исчерпать их внутренние запасы металлов.

В этой среде, обедненной металлами, ген, чувствительный к металлу, у бактерий дикого типа активируется и экспрессирует поверхностный рецептор, который отсутствует у мутантных бактерий.

Разбавляйте культуры для обеспечения равномерной плотности клеток.

Возьмите многолуночный планшет, содержащий металлобелковый комплекс.

Добавьте разведенные культуры в лунки.

Инкубируйте планшет внутри считывателя планшетов, поддерживаемого при контролируемой температуре с встряхиванием, чтобы способствовать оптимальному росту бактерий.

Измеряйте абсорбцию через равные промежутки времени, чтобы контролировать рост бактерий с течением времени.

У бактерий дикого типа рецептор металла позволяет извлекать ион металла из комплекса, поддерживая его рост.

Мутантные бактерии демонстрируют ограниченный рост, поскольку они не могут извлечь ион металла из комплекса без металлических рецепторов.

Добавьте по 10 микролитров предварительной смеси 10X и 90 микролитров CDM в каждую из т