Энциклопедия экспериментов JoVE
Микробиология
0 просмотров • 3:38 мин. • October 30th, 2025
Возьмем культуру Mycobacterium smegmatis, содержащую индуцируемые гены GFP, и мутантную люциферазу, помеченную сигналом секреции.
Мутантный ген кодирует неактивную люциферазу, но естественная неправильная трансляция во время синтеза белка приводит к образованию активного фермента.
GFP служит внутренним контролем для нормализации экспрессии люциферазы.
Добавьте индуктор для инициации экспрессии генов, затем поместите культуру в многолуночный планшет.
Вводите в выбранные лунки возрастающие концентрации исследуемой молекулы. Инкубировать.
В контрольных условиях неправильная трансляция приводит к активной секреции люциферазы.
Если исследуемая молекула ингибирует неправильную трансляцию, активная секреция люциферазы снижается.
Перенесите аликвоты культуры на черную пластину и измерьте флуоресценцию GFP.
Центрифуга для гранулирования ячеек.
Перенесите надосадочную жидкость, содержащую секретируемую люциферазу, и добавьте субстрат, где активная люцифераза катализирует свое окисление, производя люминесценцию.
Измерьте люминесценцию и рассчитайте соотношение люцифераза/GFP; Более низкое соотношение указывает на уменьшение неправильной трансляции из-за исследуемой молекулы.
Для начала закиньте два милл
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео