JoVE Encyclopedia of Experiments
Микробиология
0 просмотров • 2:17 мин • October 30th, 2025
Начните с усыпленной мыши с обнаженной трахеей. Легкие мыши были предварительно инфицированы нетипируемой Haemophilus influenzae, патогенной бактерией.
Вставьте катетер в трахею и прикрепите его к шприцу, наполненному буфером для промывки.
Введите промывочный буфер, содержащий антикоагулянт для предотвращения образования тромбов и сахар для сохранения целостности клеток.
Мягко аспирируйте, чтобы восстановить жидкость бронхоальвеолярного лаважа, содержащую эритроциты, иммунные клетки и остаточные патогены.
Повторите процедуру и объедините восстановленную жидкость для промывания в одну суспензию.
Возьмите аликвоту из объединенной суспензии и центрифугуйте для разделения ячеек. Выбросьте надосадочную жидкость.
Ресуспендируйте клетки в буфере для лизиса для селективного лизиса эритроцитов.
Центрифуга отделит оставшиеся клетки и выбросит надосадочную жидкость, содержащую мусор.
Восстановите оставшиеся ячейки в буфере.
Окончательная суспензия, содержащая иммунные клетки и остаточные бактерии, готова к последующему анализу.
Обнажите вентральную часть легкого, чтобы получить доступ к трахее. Интубируйте трахею с помощью катетера 20 калибра.
С помощью катетера закапывают 0,8 миллилитра буфера BALF и собирают промывку методом зубной аспирации. Повторите эту процедуру еще три раза, объединив четыре сбора промывания в одну суспензию.
Возьмите аликвоту объемом 100 микролитров и вращайте в течение двух минут со скоростью 2000 оборотов в минуту.
Удалите надосадочную жидкость и повторно суспендируйте в буфере для лизиса эритроцитов. Раскрутите его и снова суспендируйте гранулу с помощью 1X PBS.