Синтез антигенов мембранных белков, стабилизированных нанодисками, с использованием бесклеточной системы

Возьмем бактериальную бесклеточную систему, в которой отсутствуют неповрежденные клеточные структуры, но сохраняются молекулярные компоненты, необходимые для транскрипции и трансляции in vitro .

Ввести плазмиды, кодирующие антиген мембранного белка и белок скаффолда, а также синтетические фосфолипиды и полимеры.

Дополните смесь АТФ, ГТФ и смесью аминокислот, чтобы начать синтез белка.

Одновременно готовят кормовой раствор, обогащенный аминокислотной смесью.

Загрузите смесь во внутреннюю камеру, а питательный раствор во внешнюю камеру двухкамерного диализного аппарата.

Во время инкубации субстраты диффундируют из внешней во внутреннюю камеру через полупроницаемую мембрану, способствуя транскрипции плазмид и трансляции белка.

Белок скаффолда собирает фосфолипиды и полимеры в липидные нанодиски и способствует сворачиванию и включению МПА в эти структуры.

Побочные продукты, образующиеся в ходе реакции, диффундируют во внешнюю камеру, поддерживая оптимальные условия для образования МПА, стабилизированной нанодисками.

Готовьте MOMP-tNLP методом без клеток.

Разморозьте восстановительный буфер из набора для экспрессии бесклеточного белка за два часа до начала реакции и добавьте в буфер ингибитор пр