Вестерн-блоттинг для оценки структурной целостности бактериального вакцинного антигена

Возьмите гель SDS-PAGE, содержащий белковые полосы из мембранных частиц белка-нанолипопротеина. Эти комплексы несут белок олигомерной мембраны Chlamydia или МП, перспективный вакцинный антиген против инфекции Chlamydia .

В качестве контроля используйте белковые полосы из очищенной олигомерной МП.

Соберите гель, мембрану вестерн-блоттинга и блоттинговые компоненты в сухую блоттинговую систему.

Подайте электрический ток для переноса растворенных белков на мембрану.

Снимите мембрану и инкубируйте ее в буфере, содержащем детергенты и первичные антитела.

Детергенты блокируют неспецифические сайты взаимодействия, в то время как первичные антитела нацелены на МП.

Промойте мембрану, чтобы удалить несвязанные первичные антитела.

Инкубируйте с фторконъюгированными вторичными антителами, нацеленными на первичные антитела.

Промойте мембрану, чтобы удалить излишки вторичных антител.

Получение флуоресцентных изображений мембраны.

Молекулярные полосы, соответствующие контрольной олигомерной МП, подтверждают структурную целостность МП в комплексах, поддерживая ее антигенный потенциал.

Разрешите образцы с помощью SDS-PAGE и перенесите гелевые стеки с помощью коммерческой системы сухого блоттинга для вестерн-