Энциклопедия экспериментов JoVE
Микробиология
0 просмотров • 2:15 мин. • September 26th, 2025
Пластоглобулы — это богатые липидами капли в цитоплазме цианобактерий.
Они хранят нейтральные липиды в гидрофобном ядре, окруженном амфипатическим липидным монослоем со встроенными структурными и ферментативными белками. Накопленные липиды мобилизуются во время стресса для поддержки клеточных функций.
Чтобы их выделить, начните с сырой фракции пластоглобул, полученной из цианобактерий. Эта фракция обогащена пластоглобулами и включает в себя некоторое количество остаточных загрязняющих белков.
Смешайте эту фракцию с более густым раствором сахарозы и переложите его в ультрацентрифужную пробирку.
Наложите более светлый раствор сахарозы, чтобы создать прерывистый градиент плотности.
Центрифуга на высокой скорости в холодных условиях для предотвращения термической деградации пластоглобул.
Градиент разделяет компоненты по плотности: богатые липидами пластоглобулы низкой плотности всплывают наверх, в то время как более плотные, богатые белком загрязнители опускаются.
Соберите очищенные пластоглобулы и заморозьте их в замораживающей среде, чтобы сохранить их структуру.
Хранить при сверхнизких температурах для длительного использования.
Чтобы получить чистые пластоглобулы из цианобактерий, создайте градиент сахарозы, как упоминалось ранее, используя 500 микролитров сырых пластоглобул, 750 микролитров среды R 0,7 и 750 микролитров среды R 0,2. После центрифугирования соберите чистые пластоглобулы в 1,5-миллилитровую пробирку и аликвотируйте чистые пластоглобулы. После этого заморозьте чистые пластоглобулы в жидком азоте и храните их непосредственно при температуре минус 80 градусов Цельсия или лиофилизируйте до состояния сухого порошка.