Энциклопедия экспериментов JoVE
Микробиология
0 просмотров • 3:22 мин. • October 30th, 2025
Начните с стерильных взрослых червей C. elegans , взвешенных в среде.
Введите испытуемую бактерию и инкубируйте.
По мере того, как черви питаются, бактерии попадают в просвет кишечника и прилипают к эпителию.
Центрифуга для удаления гранул из червей и удаления непроглоченных бактерий.
Повторно суспендируйте в буфере, центрифуге и удалите оставшиеся непроглоченные бактерии.
Добавьте среду, содержащую убитую теплом кишечную палочку, и инкубируйте.
Во время кормления убитая теплом кишечная палочка вытесняет и вытесняет неадгезившие исследуемые бактерии из просвета кишечника.
Центрифугируйте и удалите надосадочную жидкость, содержащую выброшенные бактерии.
Промойте буфером, центрифугой и удалите надосадочную жидкость.
Охладите червей на льду, чтобы вызвать паралич, предотвращая дальнейшее проглатывание.
Добавьте раствор отбеливателя и инкубируйте, чтобы убить остаточные внешние бактерии.
Удалите отбеливатель и добавьте холодный буфер.
Центрифугируйте и удалите надосадочную жидкость для устранения остатков отбеливателя.
В настоящее время черви сохраняют только жизнеспособные тестовые бактерии, прилипшие к кишечному эпителию, что позволяет количественно оценить колонизацию.
Начните с повторного суспендирования образца червя в одном миллилитре M9TX-01 в микроцентрифужной пробирке. Соберите взрослых червей центрифугированием и выбросьте надосадочную жидкость. Используя одни и те же параметры центрифугирования, дважды промойте червей одним миллилитром M9TX-01 и один раз одним миллилитром буфера для червей M9, чтобы свести к минимуму количество внешних бактерий. Затем повторно суспендируйте каждый образец в одном миллилитре S-среды плюс 2-кратный термически убитый OP50 в культуральной пробирке. Инкубируйте пробирки при температуре 25 градусов Цельсия в течение 20–30 минут, чтобы неприлипшие бактерии вышли из кишечника.
После инкубации дважды промойте продуваемых червей одним миллилитром холодного M9TX-01 и выбросьте надосадочную жидкость. Положите трубки на лед на 10 минут, чтобы парализовать червей. Затем добавьте в каждую пробирку по одному миллилитру ледяного буфера для червей M9 с отбеливателем без запаха.
Инкубируйте пробирки на льду в течение минимум 10 минут, чтобы убить внешние бактерии. Выбросьте буфер для отбеливателя и верните трубки в лед, чтобы предотвратить выкачивание червей. Далее добавьте по одному миллилитру холодного M9TX-01 в каждую пробирку и центрифугируйте в течение пяти секунд в мини-центрифуге. Верните трубки в лед и удалите надосадочную жидкость. Повторите этот шаг один раз.