Механическое разрушение отдельных червей для оценки изменчивости взаимодействий хозяина и бактерии

Начните с соответствующих возрасту, стерильных, только что убитых взрослых червей C. elegans с пермеабилизированной кутикулой, взвешенных в буфере.

Эти черви заражены бактериями в кишечном тракте.

Возьмите планшет для глубоких лунок, содержащий абразивные частицы в буфере, и перенесите по одному червю в каждую лунку.

Накройте тарелку герметизирующей пленкой и крышкой.

Инкубируйте пластину при низкой температуре, чтобы предотвратить перегрев при разрушении тканей.

Нажмите на крышку, чтобы уплотнить лунки.

С помощью тканевого разрушителя механически встряхните пластину. Абразивные частицы разрушают ткани червей, высвобождая кишечные бактерии.

Постучайте по пластине и центрифугируйте ее, чтобы измельчить содержимое.

Смешайте содержимое, чтобы равномерно распределить бактерии, затем переложите их в свежие лунки.

Последовательно разводите бактериальную суспензию в буфере.

Разбавьте разбавленные пластины на агаровых пластинах и инкубируйте, чтобы обеспечить образование колоний.

Подсчитайте колонии, чтобы количественно оценить вариации кишечной бактериальной нагрузки у отдельных червей.

Чтобы подготовиться к механическому разрушению червей, приобретите стерильную двухмиллилитровую лунку глубиной 96 л