Количественная оценка полярности и динамики компонента системы секреции у Legionella pneumophila

Начнем с Legionella pneumophila, респираторного патогена, экспрессирующего флуоресцентно помеченный компонент системы секреции, необходимый для инфекции хозяина.

Чтобы количественно оценить полярность этих компонентов, получить флуоресцентные изображения и отрегулировать контраст для различения отдельных клеток.

Поместите прямоугольные области от клеточного полюса к цитоплазме для измерения градиентов флуоресценции.

Замаскируйте эти области, чтобы извлечь среднюю интенсивность и дисперсию, а затем рассчитайте оценки полярности как отношения дисперсии к средней интенсивности.

Высокие показатели полярности указывают на целенаправленное рекрутирование компонентов на полюсах бактерий.

Для динамических измерений сделайте два цейтраферных снимка и отрегулируйте контрастность, чтобы четко визуализировать ячейки.

Поместите квадратные области в центр клетки, чтобы измерить цитозольную флуоресценцию.

Маскируйте целые ячейки для коррекции фотообесцвечивания и определяйте области фона между ячейками для вычитания шума.

Экспортируйте все интенсивности и рассчитайте изменение флуоресценции с течением времени.

Повышенная интенсивность указывает на кластеризацию, в то время как пониженная интенсивность отр