Энциклопедия экспериментов JoVE
Микробиология
0 просмотров • 2:48 мин. • October 30th, 2025
Возьмите пробирку, содержащую культуру Vibrio natriegens, быстрорастущей бактерии.
Центрифугируйте культуру для гранулирования бактерий. Выбросьте надосадочную жидкость, содержащую остаточную среду.
Повторно суспендируйте бактериальную гранулу в свежей среде и переложите ее в коническую колбу, содержащую ту же среду для приготовления бактериальной культуры.
Инкубируют культуру с встряхиванием в проветриваемых условиях.
Из-за короткого времени генерации Vibrio natriegens использует питательные вещества и быстро делится, образуя концентрированную бактериальную популяцию.
С помощью спектрофотометра регулярно контролируйте оптическую плотность (OD) для определения концентрации бактерий.
Выращивайте культуру до тех пор, пока OD не достигнет примерно единицы, что указывает на экспоненциальную фазу роста с высокой метаболической активностью.
Переложите культуру в центрифужные пробирки.
Центрифуга при низкой температуре, чтобы отделить бактерии с сохранением клеточной целостности.
Поместите трубку на лед и удалите надосадочную жидкость, содержащую клеточный мусор.
Храните бактериальную гранулу при сверхнизкой температуре для последующего анализа.
Для начала промойте один миллилитр культуры Vibrio natriegens за ночь, центрифугируя ее в настольной центрифуге при 10 600 г в течение одной минуты.
Аспирируйте надосадочную жидкость, не нарушая гранулы, и ресуспендируйте в одном миллилитре свежей среды LB-V2. Внесите один миллилитр промытой в течение ночи культуры в один литр свежей питательной среды LB-V2 в автоклавную колбу Эрленмейера объемом 4 литра со стерильной крышкой для достижения соотношения разведения от одного до одной тысячи. Выращивайте культуру при температуре 30 градусов Цельсия при встряхивании при 225 об/мин.
Используйте спектрофотометр для контроля наружного диаметра культуры 600, и когда он достигнет 1,0 плюс-минус 0,2, соберите урожай, центрифугируя его в двух 500-миллилитровых пробирках при 3500-умно-умноженном g в течение 20 минут при четырех градусах Цельсия, а затем поместите на лед. Отсадите надосадочную жидкость и сразу же обработайте гранулу.