Приготовление сырого клеточного экстракта из Vibrio natriegens

Примите суспензию Vibrio natriegens, которая имеет высокую скорость синтеза белка, в охлажденном буфере, чтобы предотвратить клеточную деградацию.

Центрифуга в холодных условиях.

Выбросьте надосадочную жидкость, чтобы удалить загрязнения.

Повторно суспендируйте гранулу в небольшом объеме охлажденного буфера.

С помощью наконечника с широким отверстием перенесите суспензию в микроцентрифужную пробирку, чтобы предотвратить механический сдвиг.

Перемешайте суспензию и поместите трубку в держатель, расположенный на льду.

Опустите наконечник ультразвукового аппарата в подвес.

Инициируйте ультразвук для разрушения клеточной мембраны и высвобождения цитоплазматического содержимого.

Центрифуга для отделения нерастворимого клеточного мусора.

Соберите надосадочную жидкость или экстракт сырых клеток, содержащий содержимое цитоплазмы, в свежую пробирку.

Мгновенная заморозка клеточного экстракта в жидком азоте для сохранения его биологической активности.

Хранить при сверхнизких температурах для дальнейшего использования для бесклеточной экспрессии белка.

Охладите свежеприготовленный буфер для лизиса S30 с pH 7,7 до примерно четырех градусов Цельсия, используйте 10 миллилитров этого холодного буфера для лизис