Экспрессия бесклеточного белка с использованием бактериального сырого клеточного экстракта

В бесклеточной системе экспрессии белка используется бактериальный сырой клеточный лизат, который содержит молекулярные механизмы, необходимые для транскрипции и трансляции in vitro.

Этот лизат включает в себя факторы транскрипции, рибосомы и транспортные РНК (тРНК).

Добавьте в лизат смесь, содержащую матрицу ДНК, РНК-полимеразу, нуклеотиды и аминокислоты.

Переложите его на планшет для ПЦР и центрифугу, чтобы собрать прилипшую к стенкам жидкость. Закройте пластину, чтобы предотвратить испарение.

Инкубируйте в термоамплификаторе при оптимальной температуре, чтобы поддержать экспрессию бесклеточного белка.

Фактор транскрипции связывается с РНК-полимеразой с образованием комплекса, который связывается с матричной ДНК.

Этот комплекс катализирует синтез РНК, включая нуклеотиды для генерации матричной РНК (мРНК).

МРНК рекрутирует рибосомы, которые инициируют трансляцию, в ходе которой тРНК доставляют соответствующие аминокислоты, образуя полипептидную цепь.

Полипептид превращается в функциональный белок, готовый к последующему применению.

Для выполнения экспрессии бесклеточных белков с использованием матрицы ДНК размораживают 10X энергетическую смесь раствора, 4X аминокислотную смесь аликвот и ма