Мониторинг роста бактерий в режиме реального времени с помощью микрофлюидной системы микрокапельного культивирования

Начните с камеры для культивирования микрокапель, содержащей микрофлюидный чип с разъемами, управляемыми насосом, для потока жидкости и удаления отходов.

Поместите внутрь камеры флакон с реагентом, содержащий бактериальную суспензию, покрытую маслом.

Подсоедините верхнюю трубку бутылки к порту насоса, а боковую трубку — к разъему для чипа. Закройте камеру.

Задайте параметры кривой роста. Затем запустите генерацию капель.

Когда масло и бактериальная суспензия сходятся на Т-образном соединении, сдвиг масла разбивает водную бактериальную фазу на однородные, инкапсулирующие бактерии микрокапли.

После генерации капель снимите бутылку, подключите разъем чипа к порту насоса и закройте камеру.

Когда каждая капля проходит через путь обнаружения, оптоволоконный зонд измеряет ее оптическую плотность, представляющую концентрацию бактерий.

Перемещайте микрокапли вперед и назад, чтобы обеспечить рост бактерий.

Со временем оптическое волокно измеряет оптическую плотность капли, создавая кривую роста.

С помощью стерильного шприца объемом 10 миллилитров введите от трех до пяти миллилитров масла MMC из иглы шприца в боковую трубку во флакон с реагентом. Затем медленно наклоните и поверните флакон с реагентом, чтобы масло полностью проникло во внутреннюю стенку.

После введения в флакон пяти миллилитров исходного раствора бактерий заполните флакон с реагентом, введя пять-семь миллилитров масла MMC. Вытяните независимый быстроразъемный соединитель A флакона с реагентом и вставьте быстроразъем A в быстроразъемный соединитель B флакона, чтобы завершить операцию впрыска образца. После этого откройте дверцу операционной камеры, чтобы поместить флакон с реагентом в металлическую ванну.

Вытяните разъем C2 микросхемы и быстроразъемный разъем A флакона с реагентом. Подсоедините боковую трубку флакона с реагентом к разъему C2, а разъем верхней трубки — к разъему O2. Затем закройте дверцу операционной камеры.

Чтобы выбрать функцию измерения кривой роста, нажмите на кнопку Кривая роста. В интерфейсе настройки параметров введите Число как 15. Затем включите переключатель обнаружения OD и установите длину волны на 600 нанометров. Нажмите на вкладку «Старт», чтобы начать генерацию дроплетов.

Процесс займет 15 минут.

Когда на главном интерфейсе появится всплывающее окно с сообщением, откройте дверцу операционной камеры, чтобы вынуть флакон с реагентом и подключить разъемы C2 и O2. Закрыв дверцу, нажмите кнопку OK во всплывающем окне, чтобы автоматически культивировать капли и определить значения OD.

Когда кривая роста достигнет стационарной фазы, нажмите кнопку «Экспорт данных », чтобы экспортировать данные OD. Выберите путь сохранения данных и экспортируйте значение OD, записанное за период выращивания, в формат dot CVS. Чтобы построить кривую роста, используйте картографическое программное обеспечение, такое как Excel и Origin 9.0.