Энциклопедия экспериментов JoVE
Микробиология
0 просмотров • 4:37 мин. • October 30th, 2025
Возьмем культуру Phormidium lacuna, нитчатой цианобактерии.
Гомогенизируйте культуру для диспергирования нитей, затем центрифугируйте для гранулирования бактерий.
Выбросьте надосадочную жидкость и повторно суспендируйте гранулу в среде, богатой питательными веществами.
Добавьте плазмидную ДНК, содержащую зеленый флуоресцентный белок и гены устойчивости к антибиотикам, на агаровую пластину с добавлением антибиотиков.
Добавьте бактериальную суспензию поверх ДНК и инкубируйте в световых условиях.
Бактерии интернализуют ДНК с помощью пилей IV типа. Введенные гены интегрируются в одну из множественных копий бактериального генома.
Перераспределите бактерии на агаровую пластину с антибиотиками, чтобы выбрать преобразованные бактерии.
Под световым микроскопом определите здоровые зеленые нити, указывающие на успешное преобразование.
Перенесите выбранные филаменты в жидкие среды с более высокой концентрацией антибиотиков, чтобы обогатить преобразованную популяцию.
Опять же, положите их на агар с более высоким уровнем антибиотиков для разделения трансформантов.
Визуализируйте экспрессию GFP под флуоресцентным микроскопом для подтверждения успешного преобразования.
Начните с введения 50 миллилитров жидко
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео