Высокопроизводительный флуоресцентный анализ для изучения взаимодействия микроорганизмов и червей

Начните с трубки с червями C. elegans .

Переместите червей на многоколодную пластину с питательными веществами агарозной средой, содержащей либо контрольные бактерии, либо тестовые бактерии.

Во время инкубации черви поглощают бактерии, которые колонизируют кишечный эпителий и выделяют аминокислоты, служащие источником питательных веществ. Эти аминокислоты метаболизируются в производные аминокислот и хранятся в лизосомных кишечных гранулах.

Далее добавьте свежий буфер и перенесите червей на чёрную многообразную анализную пластину.

Добавьте в каждую скважину индуктор химического напряжения и запечатайте пластину.

Поместите пластину в считыватель флуоресцентной пластины и запишите флуоресценцию.

У червей стресс-индуктор вызывает окислительный стресс, который повреждает эпителиальные клетки кишечника.

Это приводит к разрыву родственных лизосомных кишечных гранул, высвобождая аминокислотные производные, которые при воздействии ультрафиолетового света светятся синими.

Сравните флуоресценцию червей, подвергшихся воздействию контроля, и протестуйте бактерии, чтобы оценить эффективность колонизации бактерий и их влияние на окислительный стрессовый ответ хозяина.

Отрегулируйте концентрацию червей до