Энциклопедия экспериментов JoVE
Микробиология
0 просмотров • 2:45 мин. • November 28th, 2025
Начните с трубки с червями C. elegans .
Переместите червей на многоколодную пластину с питательными веществами агарозной средой, содержащей либо контрольные бактерии, либо тестовые бактерии.
Во время инкубации черви поглощают бактерии, которые колонизируют кишечный эпителий и выделяют аминокислоты, служащие источником питательных веществ. Эти аминокислоты метаболизируются в производные аминокислот и хранятся в лизосомных кишечных гранулах.
Далее добавьте свежий буфер и перенесите червей на чёрную многообразную анализную пластину.
Добавьте в каждую скважину индуктор химического напряжения и запечатайте пластину.
Поместите пластину в считыватель флуоресцентной пластины и запишите флуоресценцию.
У червей стресс-индуктор вызывает окислительный стресс, который повреждает эпителиальные клетки кишечника.
Это приводит к разрыву родственных лизосомных кишечных гранул, высвобождая аминокислотные производные, которые при воздействии ультрафиолетового света светятся синими.
Сравните флуоресценцию червей, подвергшихся воздействию контроля, и протестуйте бактерии, чтобы оценить эффективность колонизации бактерий и их влияние на окислительный стрессовый ответ хозяина.
Отрегулируйте концентрацию червей до 15 червей на микролитр в 15-миллилитровой конической трубке. Затем передайте 8 микролитров червячного раствора в каждую из скважин восьми 96-луночных агарозных пластин NGM с помощью многоканальной или повторяющейся пипетки.
Через 36 часов впустите по 30 микролитров M9 в каждую яме пластины на 96 лунках. Далее перенесите черви на пластину с 384 яме согласно установленным наконечникам с низкой удержанием, чтобы считыватели пластин были правильно настроены. Затем пополните пластины с 384 лунками дополнительным M9, стремясь получить итоговый объём 60 микролитров на скважину, добавив 40 микролитров M9 для теста термического напряжения и 34 микролитра M9 в 6 микролитрах TBHP для окислительного стресса, вызванного TBHP.
Затем начинайте анализ в течение двух минут после добавления TBHP. Затем закройте пластины прозрачной крышкой и запечатайте края пластин с 384 лунками малярной лентой, чтобы лента не закрывалась на крышку или под пластину. Затем вставьте пластину в считыватель пластин.