Подготовка микрофлюидной пластины с бактериальными клетками

Возьмём микрофлюидную пластину, содержащую пары входных и выходных ямак, соединённых микрофлюидными каналами, включая серпантинные каналы и экспериментальный канал.

Чтобы подготовить каналы, добавьте медиа к выходной площадке.

Поставьте пластину в стадию пластины и запечатайте её стерильной крышкой.

Активируйте поток носителя из выходной ямы в входную, чтобы очистить застрявшие воздушные карманы внутри каналов.

Убери тарелку. Убрать остаточную среду из выходной ямы и добавить бактериальную культуру.

В входную скважину добавьте свежий материал, чтобы предотвратить обратный поток воздуха. Поставьте тарелку обратно на сцену.

Во время наблюдения под микроскопом возобновите поток, чтобы привлечь клетки в экспериментальный канал.

Регулируйте расход, чтобы избежать проникновения ячеек в серпентинные каналы и предотвращения закупорки.

Остановите поток и инкубируете, чтобы облегчить прикрепление бактерий.

Удалите пластину и убрать остатки бактериальной культуры и среды.

Бактерии внутри микрофлюидной пластины теперь готовы к дальнейшим экспериментам.

Для грунтовки сначала вынимите микрофлюидную пластину с 48 лунками из упаковки, не касаясь стеклянной поверхности внизу пластины, и очистите стеклянный стекло внизу пластины с помощью линзовой салфетки. Для подготовки микрофлюидных каналов в выходную скважину пипетки вводите 200 микролитров минимальной среды температурой 37 градусов Цельсия, стараясь избежать пузырьков. Затем поставьте тарелку на стадию тарелки.

Протрите интерфейс этанолом, запечатав его на пластинчатую ступень после высыхания этанола. В ручном режиме на модуле управления установите жидкость как бульон Луриа-Бертани на 37 градусов Цельсия, а максимальную прозрачность — пять дайнов на квадратный сантиметр. Нажмите на выходные ямы, чтобы активировать поток от выхода к входной яме и подготовить каналы.

Через пять минут приостановите поток, чтобы подготовиться к посеву, и аккуратно снимите тарелку со сцены. Затем аспирируйте любой остаточный материал из выходной ямы, не удаляя никакой среды из внутреннего круга, ведущего к микрофлюидным каналам. Для засея экспериментальных каналов добавьте 300 микролитров минимальной среды в входную скважину, а затем 300 микролитров бактериальной культуры в выходную скважину.

Верните пластину на стадию съёмки, убедившись, что протираете интерфейс этанолом перед установкой на пластину, и используйте прямую камеру для фокусировки на одном канале. Во время визуального мониторинга живого потока возобновите поток при 1–2 дайнах на квадратный сантиметр примерно 2–4 секунды, чтобы клетки могли войти в экспериментальный канал, но не в серпантинные каналы, и оставьте пластину на температурно контролируемом этапе на один час, чтобы клетки могли прикрепиться. В конце периода прикрепления аккуратно снимите пластину со ступени и аспирируйте бактерии из выходной ямы, не нарушая канал.

Затем используйте новый наконечник пипетки, чтобы удалить среду из входных колодцев.