Экстракция апопластических бактерий с помощью метода давления на основе шприца

Возьмём растение Arabidopsis с листьями, предварительно инобукулированными бактериями, чтобы изучить взаимодействие растений и микробов.

Эти бактерии размножаются в апопласте — межклеточном пространстве между клетками растений, формируя микроколонии.

После установления апопластической колонизации вырежьте листья и поместите их в безигловый шприц.

Добавьте дистиллированную воду, чтобы покрыть ткань.

Вставьте поршень, затем держите шприц вертикально, постучите по нему и отрегулируйте поршень, чтобы освободить застрявший воздух.

Запечатайте кончик парапленкой, чтобы создать закрытую камеру для извлечения апопласта.

Приложите положительное давление, толкая поршень до темноты ткани, что указывает на сжатие и попадание воды в межклеточные пространства для вытеснения бактерий.

Затем приложите отрицательное давление, потянув поршень, чтобы расширить тканевую матрицу и вывести жидкость и бактерии.

Повторяйте циклы давления, чтобы создать сдвиговые силы, которые нарушают микроколонии, высвобождая бактерии без повреждения растительной ткани.

Отключите шприц и соберите апопластическую жидкость с рассеянными бактериями для дальнейшего анализа.

Через четыре дня после инокуляции отрежьте либо воздушную час