Подготовка бактериальных наноцеллюлозных пелликул из бактерий, производящих целлюлозу

Возьмите микропластинку, наполненную питательной средой с маннитолом.

Инокуляруйте каждую скважину бактерией, производящей целлюлозу, и инкубируемые в статических условиях.

Во время инкубации бактерии поглощают маннитол и метаболизируют его в глюкозу.

Эта глюкоза транспортируется в комплексы целлюлозы-синтазы, встроенные в мембрану бактерии, и полимеризуется в глюкановые цепи.

Эти цепи выходят во внеклеточное пространство, где кристаллизуются в микрофибриллы.

Микрофибриллы связываются в лентовидные структуры, образуя трёхмерную наноцеллюлозную матрицу.

По мере получения большего количества наноцеллюлозы она накапливается на границе воздух-жидкость, утолщаясь в желеобразные пелликулы, формованные в форму колодца.

Собрать пелликулы и инкубировать их в щелочном растворе для лиза бактериальных клеток, затем удалить остаточную среду.

Многократно промывайте пелликулы водой, чтобы удалить остатки щелочного раствора. Храните пелликулы в воде, чтобы предотвратить обезвоживание. Затем стерилизуйте их паром для обеспечения стерильности для дальнейших применений.

Пересадите по два миллилитра жидкой культурной среды в каждую скважину 24-колодной пластины для культивирования. Берите две колонии с иглой для инокуляции из инокуляционных чашок Петри и помещайте их в первую ячейку пластины для культивирования тканей. Повторите ту же процедуру для оставшихся 23 скважин.

Инкубировать пластину для культуры тканей при 30 градусах Цельсия в течение семи дней. В итоге получится 24 BNC-пелликулы диаметром 16 мм и толщиной примерно 2–3 мм. Соберите пелликулы BNC из ростовой среды и стерилизуйте их в 200 миллилитрах раствора гидроксида натрия в течение одного часа при 50 градусах Цельсия, чтобы удалить все следы G. xylinus.

Сбросьте раствор и добавьте 200 миллилитров свежеприготовленного раствора гидроксида натрия с концентрацией один процент. Повторите тот же процесс ещё раз или пока пелликулы BNC в растворе не приобретут полупрозрачный вид. Промыйте пелликулы BNC водой три раза и храните их в воде с высокой чистотой комнатной температуры.

Убедитесь, что пелликулы BNC полностью погружены в воду и не дают им высыхать в любой момент. Затем автоклав пеликулов BNC при 121 градусе Цельсия в течение 20 минут.