Выделение эндоспор из образца окружающей среды путём целевого лизиса вегетативных клеток

Возьмите образец окружающей среды, содержащий вегетативные клетки и эндоспоры бактерии, образующей эндоспоры, а также другие бактерии.

Эндоспоры имеют защитную оболочку, которая помогает им выживать в неблагоприятных условиях.

С помощью вакуумного фильтрационного блока фильтруйте образец, чтобы задержать клетки и эндоспоры на мембране.

Положите мембрану в форму и нарежьте её на мелкие кусочки.

Переместите детали в трубку, добавьте буфер и перемешайте трубку, чтобы освободить клетки и эндоспоры.

Инкубировать с помощью возбуждения при высокой температуре, чтобы ослабить вегетативные клеточные структуры, не повреждая эндоспоры.

Остудите образец, затем добавьте лизоцим и инкубируете с помощью перемешивания. Лизоцим нарушает клеточную стенку вегетативных клеток, вызывая их разрыв.

Добавьте гидроксид натрия и моющее средство и инкубируете, чтобы разложить клеточные макромолекулы и остатки, сохраняя при этом устойчивые эндоспоры.

Отфильтруйте образец, чтобы выделить эндоспоры. Промыйте эндоспоры, чтобы удалить избыточные реагенты и подготовить их к дальнейшему анализу.

После того как фильтрационный блок и вакуумный насос будут подготовлены согласно текстовому протоколу, используйте стерильные щипц