Получение чистых бактериальных культур в жидкой среде

Начните с замороженного запаса бактерий.

Используйте стерильную инокуляционную петлю, чтобы разместить замороженные бактерии на агарную пластину с питательными веществами. Инкубировать перевёрнутую пластину, чтобы предотвратить конденсацию воды на поверхности агара.

Бактерии используют питательные вещества, растут на поверхности агара и образуют заметные колонии.

Выберите одну колонию и инокулируйте её в жидкую среду с питательными веществами для инициации чистой культуры.

Инкубировать трубку при сильном встряхивании.

Встряхивание поддерживает аэрацию в трубке и удерживает клетки в подвешенном состоянии, не давая им оседать на дне.

Это также обеспечивает равномерное распределение питательных веществ по среде, способствуя экспоненциальному росту бактерий.

Это приводит к плотной, метаболически активной бактериальной суспензии.

Бактериальная культура в жидкой среде теперь готова к дальнейшим экспериментам.

Для использования бульона с помощью стерильной инокуляционной петли удаляйте небольшое количество замороженного бульона и разведите бактерии, чтобы получить отдельные колонии на пластинах ЛБ-агар.

Инкубировать тарелки крышкой вниз в течение 12-16 часов при 37 градусах Цельсия. Получите готовую тарелку. Инокуляция 4 миллилитров жидкого LB-бульона в стерильную 10-миллилитровую культурную трубку с одной колонией, коснувшись поверхности одной колонии стерилизированной петлей и переведите её в жидкий бульон. Затем инкубировать культуру с аэрацией в шейкер-инкубаторе при 225 об/мин в течение 12-16 часов при 37 градусах Цельсия.