Флуоресцентно маркированная репрессорная блокировка с белком репликации у Escherichia coli
Энциклопедия экспериментов JoVE
Микробиология
0 просмотров • 3:09 мин. • November 28th, 2025
Возьмём генетически модифицированную культуру E. coli , экспрессирующую массивӗ хромосомного оператора тетрациклина (teTO).
Бактерии также несут плазмиду с промотором, индуцируемым арабинозой, которая стимулирует экспрессию белка репрессора тетрациклина, помеченного YFP.
Переместить культуру в обогащённую питательную среду с антибиотиками и инкубировать с помощью встряхивания для отбора клеток, содержащих плазмиду.
По мере роста клеток формируются реплисомы и инициируют репликацию хромосомной ДНК.
На экспоненциальной фазе соберите часть как неиндуцированный контроль.
Добавьте арабинозу — индуктор — к оставшейся культуре и инкубируйте обе культуры с помощью встряхивания.
В неиндуцированной культуре димер AraC остаётся связанным с ДНК-петлей, подавляя экспрессию репрессоров.
В индуцированной культуре арабиноза связывается с димером AraC, вызывая экспрессию репрессоров.
Репрессорные белки связываются с хромосомным массивом teTO, останавливая прогрессию вилок репликации.
Используйте флуоресцентную микроскопию для наблюдения обеих культур.
Флуоресцентные очаги в индуцированной культуре E. coli подтверждают блокировку репликации, опосредованную белками репрессора.
Для этой процедуры используется шт
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео