Электропорационная доставка флуоресцентных биомолекул в бактериальные клетки

Начните с охлаждённой кюветы, содержащей суспензию электрокомпетентных бактериальных клеток, которые обладают повышенной восприимчивостью к мембранной проницаемости.

Суспензия также содержит биомолекулы, помеченные органическими флуорофорами.

Примените высоковольтный электрический импульс для создания временных пор мембраны, позволяющих биомолекуле проникнуть в цитоплазму.

Добавьте насыщенную питательными веществами среду и перенесите клетки в трубку. Инкубировать для стимулирования восстановления мембраны.

Центрифугуйте клетки, затем уберите супернатант, содержащий неинтернализированные биомолекулы.

Суспензировать клетки в буфере с высоким содержанием соли с моющим средством для отделения биомолекул, прилипших к поверхности.

Снова центрифугировать, отбросить супернатант и снова подвесить ячейки в буфере.

Перенесите суспензию на фильтр и центрифуга, чтобы удалить поток, содержащий любые невнутренние биомолекулы. Затем промывайте клетки свежим буфером и снова суспензуйте.

Закрепите клетки на агарозной площадке и разместите накладку. Флуоресцентно маркированные бактерии готовы к визуализации.

Начиная с запаса флуоресцентных биомолекул, приготовленных в буфере с низкой ионной силой, переносите