Оценка активности бактериального шаперона через термическое разворачивание модельного белка
Энциклопедия экспериментов JoVE
Микробиология
0 просмотров • 2:38 мин. • November 28th, 2025
Начните с размещения кюветы в флуоресцентном спектрофотометре, оснащённом держателем и мешалкой с контролируемой температурой.
Добавьте предварительно нагретый буфер при умеренно кислом pH и установите температуру держателя для имитации условий напряжения.
В тестовый образец добавьте кислотозащитный шаперон, полученный из E. coli.
В контрольной выборке добавьте равный объём буфера.
Далее введите в оба образца температурно- и кислотно-чувствительный субстратный белок.
Начните мониторинг рассеяния света.
Инкубировать образцы в условиях напряжения, чтобы вызвать разворачивание субстрата.
При умеренно кислом pH шаперон становится активным и стабилизирует неразвернутый белок.
Добавьте сольный раствор, нейтрализующий pH, и продолжайте фиксировать рассеяние света.
В контрольном образце возврат к нейтральному pH приводит к агрегации нераскрытого белка, увеличивая рассеяние света.
В тестовом образце шаперон способствует повторному сгибанию субстрата, что приводит к снижению рассеяния света по сравнению с контролем.
Сравните сигналы рассеяния света, чтобы оценить активность шаперонов.
Поместите кварцевую кювету объёмом один миллилитр в флуоресцентный спектрофотометр, оснащённый держателями и мешалками с
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео