Оценка защитной роли кислотно-активируемого шаперона при E. coli при кислотном стрессе

Возьмём культуры рекомбинантных E. coli , чувствительных к стрессу окружающей среды.

Тестовая культура содержит плазмиду, кодирующую кислотно-активируемый шаперон, а контрольная культура — только плазмидный хребет.

Инокуляция отдельных колоний в среду с добавлением антибиотиков для обеспечения удержания плазмид и инкубацию для стимулирования роста бактерий.

Разведите культуры в свежей среде с антибиотиком и индуктором для активации экспрессии шаперона.

Выращивайте культуры до средней логической фазы, затем разбавляйте для достижения определённой оптической плотности.

Добавьте кислоту для снижения pH, вызывая кислотный стресс.

В тестовой культуре кислотные условия активируют шаперон, который стабилизирует клеточные белки и препятствует их агрегации. В контрольной культуре отсутствие шаперона приводит к денатурации и агрегации клеточных белков.

Добавьте основание для нейтрализации pH и прекращения кислотного стресса.

Отслеживайте рост бактерий, измеряя оптическую плотность со временем.

Усиленный рост в тестовой культуре указывает на защитную роль сопровождающего во время кислотного стресса.

Подготовьте ночную культуру в 50 миллилитрах LB с Ампициллином и культивируйте клетки при 200 об/мин и 3