Подвержение синтетическому оральному бактериальному сообществу имитации фаз пищеварения

Начните с трубки, содержащей синтетическое бактериальное сообщество, часто встречающееся во рту.

Добавьте имитированную слюнную жидкость, содержащую муцин, гликопротеин и фермент α-амилазу, чтобы имитировать оральную среду, затем инкубировать с помощью встряхивания.

Бактерии взаимодействуют с муцином, который способствует агрегации, в то время как α-амилаза воспроизводит ферментативные условия слюны.

Возьмите образец.

Далее введите имитированную желудочную жидкость с муцином при кислом pH, чтобы имитировать желудочную среду, и инкубировать с помощью встряхивания.

Кислые условия уничтожают чувствительные к кислоте бактериальные виды, но выживают кислотостойкие и покрытые слизистой оболочкой, слабо устойчивые к кислоте.

Возьми ещё один образец.

Наконец, добавьте имитированную кишечную жидкость, содержащую бикарбонаты и физиологические соли. Инкубировать с помощью встряхивания.

Солёная среда вызывает ионный стресс, который нарушает бактериальную мембрану и снижает жизнеспособность.

Соберите финальный образец.

Все три образца после симуляции теперь готовы к оценке жизнеспособности бактерий.

Для имитации перального пищеварения переместите 3 миллилитра бактериального сообщества в стерильную трубку объемом 50 миллилитров и смешайте с 3 миллилитрами имитированной слюнной жидкости (SSF).

Добавьте 75 единиц на миллилитр альфа-амилазы из человеческой слюны типа 9A и два грамма на литр слизи из свиного желудка типа 2. Инкубировать смесь при 37 градусах Цельсия и 100 об/мин в течение двух минут. Возьмите образец объемом 2 миллилитра для экстракции ДНК и количественной оценки с помощью потоковой цитометрии.

Чтобы имитировать желудочное пищеварение, добавьте 4 миллилитра имитированной желудочной жидкости или SGF к 3 миллилитрам бактерий. При необходимости используйте один молярный HCl, чтобы регулировать pH до 3. Инкубировать образец при 37 градусах Цельсия и 100 об/мин в течение двух минут.

Затем возьмите образец объемом 2 миллилитра. Для пищеварения тонкой кишкой добавьте 4 миллилитра имитированной кишечной жидкости или SIF в бактерии. При необходимости используйте гидроксид натрия для регулировки pH.

Затем инкубировать образец при 37 градусах Цельсия и 100 оборотах в минуту в течение двух минут и взять образец объемом 2 миллилитра.