Мягкий агаровый наложенный анализ для обнаружения бактериоцино-опосредованного уничтожения у сирингов Pseudomonas

Начните с расплавленного мягкого агара, поддерживаемого при тёплой температуре.

Инокулировать культуру Pseudomonas syringae , тестовый штамм, в агар.

Затем кратковременно используйте вихрь, чтобы равномерно распределить клетки.

Вылейте смесь на затвердевшую агарную тарелку и равномерно распределите.

Закройте крышку и дайте ей затвердеть.

Зафиксируйте фильтрованный супернатант на поверхности затвердевшего агара.

Супернатант содержит бактериоцин — антибактериальную молекулу, полученную из стресс-индуцированного донорского штамма P. syringae .

Инкубировать пластину, чтобы обеспечить рост бактериоцинов и диффузию бактериоцина через агар.

Бактериоцин связывается с определёнными поверхностными рецепторами тестового штамма и нарушает его мембрану, что приводит к гибели клеток.

Это приводит к образованию прозрачной зоны на агаре, указывающей на область, где тестовый штамм был уничтожен антибактериальной молекулой бактериоцином.

Разбавьте культуру от 1 до 100 до свежей КБ. Инкубировать культуру в течение трёх-четырёх часов, встряхивая при комнатной температуре. Далее подготовьте стерилизованный водный агар, автоклавируя суспензию агара в сверхчистой воде.

Храните расплавленный мягкий агар в водяной ба