Выделение бактерий, адаптированных к стрессу, посредством отбора в одну колонию

Возьмём бактериальную культуру, выращиваемую в состоянии стресса длительное время.

Долгосрочный стресс приводит к спонтанным мутациям, естественному отбору и пролиферации бактерий, адаптированных к стрессу.

Чтобы выделить эти бактерии, небольшой объём культуры помещают на агарную пластину, содержащую тот же стрессор, и инкубируемся.

Стрессор обеспечивает рост только бактериальных колоний, адаптированных к стрессу.

Выберите одну колонию для поддержания генетической чистоты и вводите жидкую среду в стрессор.

Инкубировать с помощью встряхивания, чтобы способствовать росту бактерий, адаптированных к стрессу.

Используйте небольшое количество культуры, чтобы внедрить свежие медиа от стрессора.

Одновременно инокулируйте другую среду, содержащую стрессор, дикими или неадаптированными к стрессу бактериями.

Измеряйте поглощение с регулярными интервалами как индикатор роста бактерий.

Сравните профиль роста, чтобы обеспечить успешную изоляцию бактерий, адаптированных к стрессу.

Подготовьте среду 1,6% агар-пластины, содержащую тот же стрессор в той же концентрации, что и в среде. Положите 0,1 миллилитра выходной культуры из хемостат и инкубируем при 37 градусах Цельсия в течение 16 часов. После инкубации с помощью стерильной зубочистки выберите отдельные колонии из пластины и введите их в пробирки объёмом 15 миллилитров, содержащие тот же стрессор и в той же средней концентрации, что и в хемостате.

Инкубировать шесть часов. Перелите один миллилитр культурного бульона в 250-миллилитровую колбу Эрленмайера с 50 миллилитрами среды. Собирайте 0,5 миллилитра культурного бульона каждый час и измеряйте оптическую плотность на уровне 600 нанометров.

Сравните скорость роста адаптированного штамма с ростом дикого типа с учётом стрессора