JoVE Encyclopedia of Experiments
Микробиология
0 просмотров • 4:04 мин • November 28th, 2025
Возьмите образец морской воды с различными микробами, включая бактерии, разрушающие окружающую среду.
Последовательно разбавляйте образец для уменьшения плотности микроорганизмов и помещайте его в питательную среду.
После инкубации выберите морфологически отличающиеся колонии, которые всё ещё могут содержать генетически и метаболически разнообразные типы бактерий.
Проведите полосу каждой выбранной колонии, чтобы рассеять отдельные клетки и инкубироваться.
Каждая клетка образует колонию, представляющую собой генетически чистый бактериальный изолят с уникальным метаболическим профилем.
Инокулятируйте каждый изолят в форму роста и инкубировать для увеличения биомассы.
Центрифугуйте культуру, сбросьте супернатант и промойте буфером для удаления остаточного материала.
Суспензируйте клетки в буфере и инокулируйте их в селективную среду, содержащую EE2 — загрязнитель окружающей среды.
Будучи единственным источником углерода в среде, EE2 отбирает бактерии, способные метаболизировать его для получения энергии и роста.
Мутность среды указывает на рост бактерий, подтверждая выделение бактериального изолята, разрушающего загрязняющие вещества.
Для отбора бактерий сначала проводят последовательные разбавления до 10 до минус девяти в стерильном солевом растворе для образцов кораллов и до 10 до минус шести для водных образцов. Пипетка разбавливает вверх и вниз пять раз, прежде чем выбраснуть кончик.
Затем закрутите каждую из них. Каждый раз встраивайте образцы в вихрь в течение пяти секунд перед следующим последовательным разбавлением. Пипетить 100 микролитров каждого разбавления на чашки Петри, содержащий 3% хлорида натрия, бульон лизогенеза, агарную среду, и выложить их на тарелку.
Инкубировать пластины в течение одного-трёх дней при целевой температуре, например, 26 градусов Цельсия. Проверяйте номера раз в день. Выберите и изолируйте колонии с отличительной морфологией роста на новых пластинах с помощью техники полосатых пластин.
Повторяйте этот шаг столько раз, сколько потребуется, чтобы на пластинах расти чистые колонии. Храните изоляты при четырёх градусах Цельсия или в глицерине, как описано в рукописи. Для проведения теста способности к разложению EE2 выберите одну колонию из свежих пластин и инокулятируйте в пробирку два миллилитра стерильной LB среды.
Если это бульон из глицерола, возьмите 10 микролитров бактериального бульона глицерина и нанесите полоски на пластины агара LB. Инкубировать при 24–28 градусах Цельсия ночью, чтобы расти отдельные колонии. Поместите трубку с LB-средой под наклоном при постоянном перемешивании при 150 g при температуре 24–28 градусов Цельсия на ночь.
После роста бактерий гранулируйте клетки, центрифугая их при 8 000 г в течение восьми минут при комнатной температуре. Отбросьте супернатант. Чтобы промыть оставшийся бульон LB, добавьте два миллилитра физиологической воды, чтобы клетки снова суспензировались.
Повторите промывку дважды, чтобы убедиться, что нет следов углерода. Инокулировать промытые и вновь взвешенные клетки в минимальную культурную среду Bushnell Haas, содержащую EE2 как единственный источник углерода. Оценить рост бактерий по оптической плотности на 600 нанометрах и формировании колоний на среде LB агарной среды через 16–72 часа инкубации.
В данном исследовании описывается метод выделения и характеристики бактерий, способных разлагать загрязнители окружающей среды, в частности EE2. Используя серийные разведения и селективные среды, исследователи могут идентифицировать и культивировать бактериальные изоляты, разлагающие загрязняющие вещества.
Выделение морских бактерий, разлагающих загрязняющие вещества, позволяет проводить валидацию мишеней на ранних этапах разработки методов биоремедиации путем идентификации штаммов со специфическими метаболическими возможностями. Такой подход способствует снижению механистических рисков в экологической биотехнологии за счет подтверждения функциональных путей деградации перед масштабированием процесса. Данный метод обеспечивает прогностическую уверенность при выборе штаммов для последующей разработки решений по ремедиации на основе микроорганизмов.
Данный метод вписывается в общую последовательность этапов поиска — от первоначального отбора проб из окружающей среды до идентификации перспективных соединений и доклинической оценки кандидатов для биоремедиации.
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Похожие видео
0 Просмотры
Последнее обновление: 29 августа 2026