Селективное обогащение и изоляция морских бактерий, разлагающих нефть, из образцов морской воды

Начните с образца морской воды, содержащего различные микробные сообщества, включая бактерии, способные разлагать углеводороды.

Проведите серийное разбавление образца в физиологическом растворе для снижения плотности микроорганизмов.

Добавьте сырое масло в стерильную дистиллированную воду и перемешайте смесь, чтобы частично растворить углеводороды в нефти.

Дайте смеси осесть, разделяя её на водорастворимые и нерастворимые в воде фракции масла.

Подготовьте селективные агарные пластины, используя каждую фракцию масла как единственный источник углерода для обогащения бактерий, разлагающих растворимые или гидрофобные углеводороды.

Разбавленные образцы морской воды наносят на селективную среду и инкубируют при окружающей температуре.

Появляющиеся колонии зависят от ферментов, таких как гидроксилазы и диоксигеназы для метаболизма углеводородов.

Выберите морфологически разные колонии и перенесите их на свежую среду с той же фракцией масла, чтобы получить чистые культуры бактерий, разлагающих углеводороды.

Этот метод позволяет селективно выделить морские бактерии, разрушающие масло.

Чтобы подготовить минимальное количество среды, содержащее растворимую фракцию масла-вода и нерастворимую фракцию масла-вода, в качестве единственного источника углерода добавьте 1–2% сырого масла к 500 миллилитрам стерильной дистиллированной воды в фильтрующую колбу с клапаном на дне. Держите флягу под постоянным перемешиванием при температуре 24–28 градусов Цельсия при 150 градусах g в течение 48 часов. После этого поставьте колбу на устойчивую поверхность и подождите 10–20 минут, чтобы растворимая и нерастворимая фракция отделились.

Затем откройте нижний фильтрующий флакон, чтобы перевести растворимую фракцию масла и воды в новую стерильную колбу, что позволило сохранить нерастворимую фракцию масла-вода. Затем подготовьте две бутылки минимального среднего масла Bushnell Haas. Автоклав.

В сочетании с маслорастворимой фракцией как единственным источником углерода получается 500 миллилитров агарной среды. То же самое сделайте с нерастворимой фракцией масло и воды и переложите примерно 25 миллилитров каждого материала на отдельные чашки Петри. Для выделения бактерий, разлагающих масло, повторно используйте ранее разбавленные образцы и пипетить по 100 микролитров каждого разбавления на чашки Петри с агаровой средой и уложить их на пластины.

Не забывайте сохранять отрицательный контроль для своих тарелок. Инкубировать блюда в течение одного-трёх дней при нужной температуре и повторить процедуры изоляции как раньше.