Энциклопедия экспериментов JoVE
Микробиология
0 просмотров • 3:01 мин. • November 28th, 2025
Начните с трубок с генетически модифицированными бактериальными клетками. Каждая бактерия содержит высококопируемые фосмиды, которые кодируют различные ферменты.
Инкубировать трубки с помощью встряхивания для облегчения экспрессии различных внутриклеточных ферментов.
Добавьте субстрат, специфичный для целевого фермента, в пробирку и равный объём буфера в контрольную трубку.
Инкубировать с помощью встряхивания. Субстрат проникает в клетки, где целевые ферменты его расщепляют, образуя флуоресцентный продукт.
Загрузите управляющую трубку в заранее откалиброванный потоковый цитометр.
Когда каждая ячейка проходит через лазерный луч, она рассеивает свет. Сгенерируйте график рассеяния для идентификации отдельных ячеек, которые рассеивают меньше света, чем скопления.
Исключить сгустки клеток и построить сигнал флуоресценции отдельных клеток для установления базовой флуоресценции.
Поместите обработанную субстратом трубку в потоковый цитометр для измерения флуоресцентного сигнала.
Повышенный сигнал флуоресценции в клетках, обработанных субстратом, по сравнению с контрольными клетками подтверждает экспрессию целевых ферментов.
Для скрининга интересующих метагеномных ферментов инкубировать отсортирован
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео