Энциклопедия экспериментов JoVE
Микробиология
0 просмотров • 2:12 мин. • November 28th, 2025
Начинайте с трубки, помещённой в анаэробную камеру, содержащую богатую питательными веществами среду и предварительно гидратированную ферментируемую клетчатку.
Условия с недостатком кислорода внутри трубки имитируют анаэробную среду человеческой толстой кишки.
Затем добавьте разбавленный, гомогенизированный образец кала с микробами кишечника в пробирку и инкубируйте его.
Регулярно переворачивайте трубку, чтобы смешать микробы с волокном.
Во время инкубации микробы анаэробно метаболизируют и ферментируют клетчатку, образуя короткоцепочечные жирные кислоты и другие метаболиты, снижая pH среды.
Собирайте аликвоты из ферментирующей смеси с регулярными интервалами для мониторинга производства метаболитов и проверки их pH.
Центрифугуйте аликвоты при низких температурах, чтобы разделить микробную биомассу в гранулы.
Перенесите супернатант, содержащий метаболиты и короткоцепочечные жирные кислоты, в свежую трубку.
Заморозьте как микробную биомассу, так и супернатант в жидком азоте.
Наконец, храните образцы при низкой температуре для дальнейшего анализа.
Держите инокуляционные трубки при 37 градусах Цельсия внутри анаэробной камеры и аккуратно инвертируйте раз в час, чтобы снова суспензировать волокна и инокулум. Через 3, 6, 9 или 24 часа достаните нужное количество ферментированной среды и центрифугайте образцы при 14 000 раз на г в течение 10 минут при 4 градусах Цельсия.
Немедленно заморозьте супернатант и гранулу в жидком азоте, затем после быстрого заморозки храните супернатант для анализа короткоцепочечных жирных кислот и гранулу для анализа микробиома при минус 80 градусах Цельсия.