Мониторинг роста бактерий в различных составах сред с помощью автоматизированного микробиореактора

Возьмём культуру генетически модифицированной бактерии, созданной для хранения плазмиды, экспрессирующей секреторный флуоресцентный белок и обеспечивающей устойчивость к антибиотикам.

Инокулятируйте его в среду с антибиотиком и инкубируйте с помощью встряхивания, чтобы стимулировать рост бактерий.

Антибиотик гарантирует, что только клетки, удерживающие плазмиду, могут размножаться.

Когда культура достигнет нужной плотности, переведите её в автоматизированную систему обработки жидкости.

Плита с глубокой скважиной содержит разные концентрации необходимых питательных веществ, которые помещаются в микротитровую пластину для создания различных составов среды.

Инокулируйте каждую ямку пластины бактериальной культурой.

Запечатайте пластину и поместите её в микробиореактор, который поддерживает равномерную температуру и аэрацию.

Разные формулы приводят к вариациям роста бактерий и секреции флуоресцентного белка.

Оптический датчик в устройстве измеряет плотность клетки и флуоресценцию, позволяя сравнивать рост бактерий и производство флуоресцентного белка в разных составах среды.

Стерилизуйте плиты с глубокими скважиными для хранения раствора на рабочем столе, протирая пластины 70 процентов этанола и затем сушите их в ламинарном вытяжке. Начинайте семенную культуру, инокуляцируя 50 миллилитров BHI-среды с 25 миллиграммами на литр канамицина с одним аликвотом из рабочего банка клеток. Разместите всю необходимую лабораторную посуду на роботизированный рабочий стол и налейте растворы бульона в соответствующую лабораторную посуду.

Затем начните роботизированную работу по подготовке среды, чтобы последний этап — инокуляция — был достигнут вовремя к началу культуры семян. Через примерно два часа возьмите пробу из семенной культуры, чтобы отслеживать рост, измеряя оптическую плотность на 600 нанометрах или_{OD 600}. Продолжайте следить за ростом каждый час.

Примерно через пять часов культура достигает_{OD 600} между тремя и четырьмя и используется для вакцинации основных культур. Поместите семянную культуру на рабочий стол жидкостного обработчика и продолжите процесс подготовки медиа. После инокуляции запечатайте микротитровые пластины культивации.

Далее поместите запечатанный MTP культивации в устройство Biolector. Затем начните заранее определённый протокол культивации.