Долгосрочное криоконсервирование штаммов цианобактерий с использованием глицерина или диметилсульфоксида

Начните с инокуляции петли цианобактерического штамма на среду роста. Инкубировать, чтобы клетки могли вырасти до нужной плотности.

Промыйте клетки центрифугой и удалите супернатант, содержащий остаточные метаболиты и мусор.

Подвесьте пеллет в небольшом объёме растительной среды, чтобы создать концентрированную суспензию.

Смешайте аликвот этой суспензии с глицерином — криопротектором, который стабилизирует мембрану и предотвращает образование кристаллов льда во время заморажения.

К другому аликвоту добавьте диметилсульфоксид — криопротектор, который проникает в клетки и подавляет нуклеацию льда.

Храните образцы при низких температурах, когда метаболическая активность останавливается, а клетки сохраняют жизнеспособность длительное время.

Для восстановления небольшое количество замороженной биомассы соскребли на агарную пластину без антибиотиков и полосы, чтобы снизить стресс и поддержать постепенное восстановление.

Этот метод позволяет долгосрочно криоконсервировать и возрождать штаммы цианобактерий для будущих исследований.

Для долгосрочного хранения штаммов создайте свежую культуру сорта, инокуляцируя петлю клеток в 30–50 миллилитров среды BG11. Выращивайте культуру в течение трёх-четырёх дней до_{OD 750} , равной 0,4–0,7.

После однократной промывки клеток BG11 снова суспензируйте гранулу примерно в двух миллилитрах BG11. Добавьте 0,8 миллилитра концентрированных клеток в одну трубку. Затем добавьте 0,2 миллилитра 80% фильтрующего стерилизованного глицерина.

В другую трубку добавьте 0,93 миллилитра концентрированных клеток и 0,07 миллилитра ДМЗО. Храните обе трубки при минус 80 градусах Цельсия. Чтобы оживить штаммы, удалите трубку и с помощью тупой зубочистки соскоблите некоторые клетки на агарной пластине без антибиотиков. Затем используйте стерильную петлю, чтобы вывести полосу как обычно.