Моделирование фагоцитоза, опосредованного комплементом, с использованием опсонизированных эритроцитов in vitro

Возьмём IgM-опсонизированные эритроциты овец (SRBC) с антителами IgM, связанными с антигенами на поверхности клеток.

Добавьте сыворотку, содержащую белки комплемента, кроме C5.

Комплекс C1 связывается с антителами и становится активным.

Активированный C1 расщепляет C4 и C2, образуя конвертазу C3, которая затем расщепляет C3 и откладывает C3b на SRBC.

Без C5 C3b деградирует до C3bi.

Добавьте SRBC в макрофаговую культуру.

C3bi связывается с макрофагным рецептором, вызывая фагоцитоз SRBC.

Добавьте гипотонический раствор для лиза и удаления неинтернализированных SRBC.

Добавьте буфер для лизисирования клеток и высвобождения гемоглобина SRBC.

Введите реагент для обнаружения.

В присутствии мочевины гемоглобин катализирует окисление диаминофлуорена перекисью водорода, образуя окрашенный продукт.

Измерьте поглощение окрашенного продукта, которое пропорционально фагоцитированным SRBC.

Этот анализ моделирует фагоцитоз бактерий с антителами с использованием опсонизированных SRBC для имитации бактериальных мишеней.

Для опсонизационного анализа инкубировать 2 раза 10 до восьмой овечьих эритроцитов или РБК с 50 микролитрами иммуноглобулина против SRBC M или IgM в течение 30 минут при комнатной температуре.

Зат