Визуализация локализации бактерий и взаимодействия хозяина в ткани лёгких человека

Возьмём флуоресцентно маркированную суспензию Staphylococcus aureus и альвеолярную ткань лёгких человека, инфицированную теми же флуоресцентно маркированными бактериями.

Вставьте дистальный конец фиберистого конфокального флуоресцентного микроскопического зонда в бактериальную суспензию и сканируйте.

Яркие флуоресцентные сигналы подтверждают маркировку бактериальных мембран и успешную активацию зонда

Запишите флуоресценцию по мере движения зонд по подвеске.

Используя ткань для очищения линз, пропитанную перекисью водорода, протрите зонд, чтобы удалить остаточные бактерии и предотвратить фоновую флуоресценцию.

Подведите очищенный зонд непосредственно к ткани и сканируйте поверхность.

В ткани волокна коллагена и эластина выглядят как автофлуоресцентные матриксы, а флуоресцентно маркированные бактерии видны в виде отдельных ярких пятен.

Альвеолярные пространства, не имеющие флуоресценции, выглядят как тёмные участки.

Запишите видео, чтобы зафиксировать как тканевые прилипшие, так и слабо связанные бактерии, что позволяет визуализировать бактериальную инфекцию в альвеолярной ткани лёгких хозяина в реальном времени.

Чтобы начать сбор данных, нажмите кнопку «Старт» на экране или нажмите педаль левой ноги, чтобы включить лазер. Далее снимите каждый образец бактериальной суспензии. Вставьте дистальный конец волокна FCFM и медленно проведите волокно по подвеске, чтобы исследовать образец.

Записывайте видео любой длины, нажимая педаль правой ноги или выбирая элементы записи на экране, пока волокно медленно движется вокруг сэмпла. Очистите дистальный конец волокна FCFM 8% перекиси водорода и очистите линзовые ткани между образцами. Для получения изображения каждого образца легкой ткани вставьте дистальный конец волокна FCFM в образец, обеспечивая прямой контакт между концом волокна и тканью.

Затем аккуратно двигайте конец волокна для изучения образца. Подъём конца волокна от ткани удаляет ткань из фокальной плоскости. Однако это может использоваться для изображения меченых бактерий, которые не прилипли к ткани.

Записывайте видео любой длины, нажимая педаль правой ноги или выбирая элементы записи на экране, пока волокно медленно движется вокруг сэмпла.