Энциклопедия экспериментов JoVE
Микробиология
0 просмотров • 3:04 мин. • January 30th, 2026
Начните с культуры Legionella pneumophila — патогенной грамотрицательной бактерии, которая выделяет внешние мембранные пузырьки.
Эти OMV содержат липополисахариды и мембранные белки, способствующие вирулентности бактерий.
Центрифугуйте культуру, чтобы бактерии были целыми гранулами.
Соберите супернатант, содержащий OMV, и снова центрифугуйте для гранулирования остаточных бактерий.
Фильтруйте супернатант через мембрану, чтобы удалить оставшиеся бактерии при сохранении ОМВ.
Проведите вторую фильтрацию с помощью свежей мембраны для удаления бактериальных остатков.
Соберите фильтрат, свободный от бактерий, и ультрацентрифугайте его, чтобы пеллетировать OMV.
Сбросьте супернатант, снова суспензируйте гранулу в буфере и снова ультрацентрифуга, чтобы удалить слабо связанные белки и липополисахариды.
Удалите супернатант и снова подвесьте очищенные OMV в буфере.
Разведите аликвот OMV на кровавые агар и BCYE агаровые пластины и инкубируетесь.
Отсутствие формирования колоний подтверждает отсутствие бактериального загрязнения.
Храните OMV при низкой температуре для исследований взаимодействия хозяина и патогена.
Оставшуюся жидкую культуру добавьте в 90 миллилитров свежей среды YEB и инкубируйте культуру на
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео