Энциклопедия экспериментов JoVE
Микробиология
0 просмотров • 4:02 мин. • February 2nd, 2026
Возьмём всю РНК, извлеченную из мозга мыши, заражённого патогенными бактериями. Экстракт содержит транскрипты генов, чувствительных к инфекции.
Добавьте фермент, разрушающий ДНК, и инкубируйте, чтобы разложить остаточную геномную ДНК.
Добавьте мастер-микс, содержащий фермент обратной транскриптазы (RT), нуклеотиды и неспецифические праймеры.
Инкубировать для синтеза комплементарной ДНК (кДНК).
Введите высокую температуру для инактивации фермента RT.
Возьмём мастер-смесь с ДНК-полимеразой, нуклеотидами, двуцепочечной красителем, связывающим ДНК, и праймерами, специфичными для целевого гена.
Добавьте кДНК и нагрейте ДНК для денатурации.
Праймер связывается с целевой кДНК, что позволяет синтезировать новые цепи ДНК.
Цикл повторяется для усиления целевого гена.
Краситель связывается с амплифицированной ДНК и излучает флуоресценцию, которая фиксируется в конце каждого цикла.
Повышение флуоресценции подтверждает экспрессию гена, реагирующего на инфекцию, в мозге инфицированной мыши.
Инфицировать всех мышей с помощью планктонных или биопленочных клеток и провести эвтаназию, как описано в текстовом протоколе. Далее извлеките всю РНК из ткани мозга с помощью набора для экстракции РНК.
Для каждой мыши и
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео