Аэрозольная доставка Mycobacterium tuberculosis при легочной инфекции в модели мыши

Начните с замороженного запаса Mycobacterium tuberculosis — патогенной бактерии, вызывающей туберкулёз лёгких.

Разморозьте флакон и аккуратно перемешайте суспензию, чтобы рассеять комки бактерий и обеспечить равномерную концентрацию.

Разбавить необходимый объём в стерильном буфере для подготовки стандартизированного аэрозольного инокуля.

Зафиксируйте мышь в сетчатом держателе, чтобы ограничить движение, и поместите её в герметичную камеру воздействия аэрозолей.

Загрузите подготовленный инокулюм в шприц и введите его в небулайзер, прикреплённый к камере.

Активируйте систему вдыхания, которая использует сжатый воздух для небулайзеризации суспензии в мелкие, дыхательные капли.

Эти капли, содержащие жизнеспособный M. tuberculosis, распространяются в воздух камеры.

Сознательная мышь вдыхает аэрозоль, позволяя жизнеспособным бактериям проникнуть глубоко в лёгкие и инициировать инфекцию.

Мышиная модель туберкулёза лёгочного заболевания теперь готова к дальнейшим исследованиям.

Начните с прогрева запасов известного титра КФУ Mycobacterium tuberculosis . Когда клетки оттаяв, используйте шприц объёмом 1 миллилитр с иглой 27-го калибра, чтобы аккуратно перемешать суспензию пять раз, чтобы рассеять бактериальные комки, избегая образования аэрозолей. В зависимости от желаемой дозы инфекции перенесите необходимый объём микобактериального запаса в 50-миллилитровую трубку с стерильным PBS до итогового объёма 6 миллилитров. Затем разместите экспериментальных животных по отдельности в сетчатые корзины. Положите корзины в круглую аэрозольную камеру и закройте крышку камеры.

Подключите блок небулайзера Вентури к трём сочленениям нержавеющей стали. Аспирируйте микобактериальную суспензию в 10-миллилитровый шприц, оснащённый тупой иглой 18-го калибра, и отнесите шприц в аэрозольную камеру в закрытом транспортном ящике. Теперь снимите крышку небулайзера и аккуратно введите суспензию микобактерий в устройство, стараясь избежать образования аэрозолей.

Выбросьте шприц в контейнер для острых предметов с 2% буратоном, а затем запечатайте небулайзер.

Включи ингаляционный аппарат.

Когда цикл завершится, убедитесь, что суспензия микобактерий полностью небулайзерована.