Выделение бактерий из среднего кишечника комаров

Начните с стекла, содержащего анестезиированного взрослого комара в капле фосфатно-буферного физиологического раствора или PBS.

Под вскрытием микроскопа удалите у комара ноги, крылья и голову.

Отрежьте кончик живота, чтобы не повредить пищеварительный тракт.

Закрепите грудную клетку и конец живота, затем аккуратно вытяните пищеварительный тракт, чтобы удалить их.

Извлеченный пищеварительный тракт включает средний кишечник, который отвечает за пищеварение и содержит разнообразные кишечные бактерии, влияющие на физиологию комаров.

При большем увеличении аккуратно удалите окружающие структуры, чтобы изолировать среднюю часть кишечника.

Перенесите изолированный средний кишечник в новую трубку с PBS.

Гомогенизировать средний кишечник, чтобы выпустить бактерии в PBS.

Разведенный гомогенат нанесите на питательную агарную тарелку.

Инкубировать пластину для роста бактериальных колоний, представляющих микробную флору среднего кишечника комаров.

Отдельно вскрытие комара на стерильном стеклянном стекле, содержащем каплю PBS. Аккуратно удалите ноги, крылья и голову комара щипцем.

Зажмите грудь комара и последнюю часть живота щипцами и разъедините, чтобы изолировать пищеварительный тракт.

Используйте щипцы, чтобы удалить урожай и мальпигиевую трубку из пищеварительного тракта. Культура располагается в передней части среднего кишечника и выпуклость после употребления сахарной воды. Мальпигиевые трубки — это группа тонких выделенных трубок на стыке среднего и заднего кишечника.

Поместите вскрытый средний кишечник в трубку EP с 200-микролитровым стерильным буфером PBS и измельчите его стерильным пестиком на очень чистом столе. Последовательно разбавьте гомогенат до трёх 10-кратных разбавлений при 50 микролитрах каждого разбавления на пластине ЛБ агара, а затем распределите пластину.

Инкубировать пластину при 37 градусах в течение одного-двух дней, пока не появятся отдельные колонии.