Моделирование инфекции у неонатальных мышей с использованием инкапсулированных биолюминесцентных бактерий

Начните с неонатальных мышей по возрасту.

Аккуратно поднимите кожу на затылке каждого щенка. Подкожно вводите одному щенку суспензию патогенных бактерий с низкой концентрацией, а другому — с суспензией высокой концентрации.

Эти бактерии экспрессируют биолюминесцентный оперон, который производит фермент люциферазы и его субстрат, обеспечивая автономное излучение света.

Защитная полисахаридная капсула окружает бактерии и маскирует их поверхностные антигены, препятствуя распознаванию иммунными клетками малышей.

Верните щенков их биологической матери для послеродового ухода.

Пролиферация бактерий в месте инъекции вызывает воспаление и повышает сосудистую проницаемость, что способствует проникновению бактерий в кровь и системному распространению.

Поместить анестезиированных щенков под люминесцентную визуализацию.

Люцифераза окисляет субстрат, создавая видимый свет, позволяя визуализировать бактерии внутри детёнышей.

Снимайте изображения со временем для сравнения роста и распространения бактерий у щенков, вакцинированных с высокими и низкими концентрациями бактерий.

Начните с размещения щенков по возрасту в группы с высокими или низкими дозами в шкафчике второго уровня биобезопасности. На 3-й или 4-й день после родов зафиксируйте вес всех щенков до вакцинации.

Загружайте инсулиновые шприцы PBS или высоко- или низкой дозой E. Инокулум Coli Lux в шкаф с биобезопасностью и положите загруженные шприцы на лёд.

Положите новорождённого для инъекции на чистую поверхность в шкафу биобезопасности и поднимите кожу на затылке, словно чтобы погладить щенка. Введите иглю вверх чуть ниже кожи в промежутке между кожей и мышцами. Когда игла почувствуется под кожей, введите 50 микролитров инокулента, одновременно освободив защемленную часть кожи, чтобы предотвратить обратный поток. Затем медленно и аккуратно убирайте иглу.

Когда всем щенкам будут введены одинаково, верните их к их матерям. Сразу после инъекции и в соответствующие экспериментальные моменты поместите клетку с E. Неонатальные мыши, инфицированные Coli Lux, и они попадают в биобезопасность уровня 2 с ламинарным потоком и открывают программное обеспечение в микрокомпьютере КТ. После инициализации системы и ожидания фиксации температуры ступени на уровне 37 градусов Цельсия и CCD-температуры на минус 90 градусах Цельсия, поместите до четырёх анестезированных пупцов на камеру в камере в положении лежа.

Закройте дверь камеры изображения и выберите вариант люминесцентного изображения. Выберите открытый фильтр и далее, установите фильтр возбуждения как блок, а фильтр излучения — как открытый. Выберите 500, 520, 560, 580, 600 и 620 нанометров.

Затем сделайте изображение щенков перед тем, как вернуть их в клетку с плотиной, с наблюдением до восстановления анестезии.